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獨家發布:新型熒光標記微管探針,無需洗脫

微管具有多種細胞功能,包括在有絲分裂期間分離染色體、維持細胞形態、調控纖毛和鞭毛的擺動以及參與細胞物質的運輸。大量腫瘤化學療法靶向微管蛋白的組裝或拆卸過程,強調了微管與腫瘤發生發展的關系。另外,研究表明,微管組裝或拆卸的失調與神經退行性疾病相關。

從結構上講,微管是由 α-和 β-Tubulin 異二聚體組成中空管狀結構,它們端對端連接形成原纖絲,原纖絲橫向組合構成 25 nm 的微管。與 α-和 β-Tubulin 不同的是 γ-Tubulin,其包含在微管組織中心(MTOC)中。通過與其他蛋白質的結合,γ-Tubulin 充當 α/β-Tubulin 二聚體起始聚合的支架。

微管結構示意圖,圖片來源:biologydictionary.net

 

特異性示蹤微管蛋白,是解析疾病病理機制、揭秘微管蛋白功能的重要前提。

Tocris®獨家發布的新型微管探針紫杉醇 Janelia Fluor® 646(貨號 6266),可用于微管細胞骨架的直接成像。該探針僅在與微管結合時才發出熒光,因此實驗過程中無需洗脫。

 

  • 紫杉醇是與 Tubulin 結合的二萜,可促進并穩定 Tubulin 蛋白聚合,這是其具有抗有絲分裂和細胞毒性作用的原因。熒光染料與紫杉醇的偶聯為微管細胞骨架的成像提供了便捷的方法。基于此原理的熒光探針有 Flutax 1(貨號 2226)和 Flutax 2(貨號 6254)。

 

  • 新型微管探針結合了紅色熒光染料 Janelia Fluor® 646,最大激發波長為 646 nm;最大發射波長為 664 nm。Janelia Fluor® 系列熒光染料相較于普通熒光染料,其熒光更明亮,光穩定性更高。最突出的優勢在于其具有細胞膜通透性,能夠進行活細胞染色或固定細胞染色,以及細胞內的單分子示蹤。

 

紫杉醇 JaneliaFluor® 646 探針在 COS7 細胞上的應用:COS7 細胞用 3 µM 紫杉醇 JaneliaFluor® 646 標記,在 37 °C 下放置 1 小時。在 Leica TCS SP8 共焦激光掃描顯微鏡上成像并拍攝。

 

附紫杉醇 JaneliaFluor® 646 實驗方案:

  1. 在 DMSO 中準備紫杉醇 JaneliaFluor® 646 的儲備溶液。儲備溶液可以等分并在 ≤ -20 °C 的環境下最多保存 1 個月;
  2. 將儲備溶液稀釋到 37 °C 的溫熱培養基中,然后放入預熱的盒子中(用于存放于培養箱)。工作溶液應在同一天制備并使用;
  3. 以 3 μM 的終濃度應用于活細胞檢測,也可以使用較低的濃度,并且應針對不同的實驗優化濃度;
  4. 在 37 °C 孵育 1 小時之后成像。理論上無需洗脫,若選擇洗脫方案,可在成像前用 1x PBS 和 2% 的 BSA 沖洗細胞 3 次,并加入新鮮培養基。

 

以上內容來源于Bio-techne

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